HT22-GFP-Puro+ffluc2穩轉株
產品名稱 | HT22-ffluc2-GFP-Puro 穩轉細胞株 |
產品貨號 | XY-M1234 |
中文名稱 | ffluc2 和 GFP 雙標的 HT22 穩轉細胞株 |
細胞規格 | 復蘇細胞 (T25細胞瓶) 或1 × 106 細胞凍存細胞 |
細胞形態 | 上皮細胞樣 |
生長特性 | 貼壁生長 |
細胞株 構建流程 | (1)構建目的基因過表達慢病毒重組質粒,并包裝慢病毒; (2)慢病毒以合適的MOI值轉導靶細胞; (3)用最佳濃度藥物對細胞株進行篩選,獲得混合穩轉細胞株; (4)穩轉細胞株質檢(COA)。 |
完全培養基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S(選擇添加) |
培養條件 | (1) 氣相:95%空氣,5% CO2;(2) 溫度:37 ℃。 |
細胞凍存 | 無血清凍存液(VGA-0046-100) |
存儲條件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |
HT22-GFP-Puro+ffluc2 穩轉株概述
HT22 細胞是源自小鼠海馬的永生化神經元細胞系,常用于神經生物學、神經毒性、細胞凋亡等研究。
** 穩轉株(穩定轉染細胞株)** 是通過基因工程手段將外源基因穩定整合到細胞基因組中,使其能夠長期表達特定蛋白的細胞群體。
各組件功能與應用
1. GFP(綠色熒光蛋白)
功能:作為報告基因,用于實時可視化觀察細胞形態、定位及轉染效率。
應用:
熒光顯微鏡下追蹤細胞分布(如神經元突起生長、細胞凋亡過程)。
流式細胞術(FACS)篩選陽性細胞克隆。
體內成像研究(需結合活體熒光成像系統)。
2. Puro(嘌呤霉素抗性基因)
功能:篩選工具,用于富集成功整合外源基因的細胞。
機制:未轉入抗性基因的細胞會被嘌呤霉素殺死,存活細胞即為穩定轉染株。
應用:穩轉株構建過程中的選擇性培養,確保外源基因持續表達。
3. ffluc2(螢火蟲熒光素酶 2)
功能:生物發光報告基因,需底物熒光素(Luciferin)觸發化學反應產生光信號。
優勢:
靈敏度高,適用于微量細胞或活體動物體內成像(如腫瘤轉移、神經退行性疾病模型)。
信號可定量,通過酶標儀或活體成像系統檢測發光強度,反映基因表達水平。
應用場景:
體內外細胞增殖、凋亡、藥物療效的動態監測。
構建荷瘤小鼠模型,追蹤腫瘤生長與治療響應。
穩轉株構建流程(示例)
載體構建:將 GFP、Puro 抗性基因和 ffluc2 編碼序列克隆至同一質粒載體(如慢病毒載體)。
細胞轉染:通過病毒感染(慢病毒 / 逆轉錄病毒)或化學轉染法將載體導入 HT22 細胞。
抗性篩選:添加嘌呤霉素培養 2-3 周,殺死未成功轉染的細胞。
單克隆挑選:通過有限稀釋法或流式細胞術篩選單克隆細胞,確保外源基因穩定表達。
鑒定驗證:
熒光顯微鏡檢測 GFP 表達(綠色熒光)。
luciferin 底物檢測 ffluc2 活性(發光信號)。
Western blot 或 PCR 驗證目的基因蛋白 / RNA 水平。
僅用于科研,不能用于臨床診斷!所有產品僅供科研使用,不得用于人或動物的治療等任何其他用途,不為任何個人提供產品和服務。
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